小金工
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荧光定量 PCR从方法上来说，可分为荧光染料法和荧光探针法。 荧光染料法常用的荧光染料包括： SYBR GreenⅠ、Eva Green 和 Pico Green 等，其中 SYBR GreenⅠ应用最为广泛。SYBR GreenⅠ的最大优势在于可用于监测双链 DNA 序列的扩增，对 DNA 模板没有选择性，通用性强，使用方便，不需要设计和合成复杂的探针，灵敏度高，价格便宜。但是 SYBR GreenⅠ会与体系中非特异性的双链 DNA 结合产生假阳性的信号，影响实验结果的准确性。 荧光探针法分为水解探针和杂交探针两种。TaqMan 探针是最常见也是应用最广泛的水解探针， 可以与互补靶序列进行特异性结合。TaqMan 探针的优势在于特异性高，引物设计相对简单，重复性好；局限性表现在只适合特定的目标，荧光探针不能自行标记，合成价格较高。杂交探针中应用最多的是分子信标。
