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1、无菌培养实验室准备（同细胞传代培养），从CO2培养箱中去除细胞，弃去培养液，加入0.25%的胰蛋白酶消化细胞，弃去胰蛋白酶液，使用新的含10%小牛血清的培养基制成细胞悬液后计数。
2、按照4×103细胞/孔接种于96孔板，0.2ml培养基/孔（如果是悬浮细胞，则0.1ml培养基/孔），做传代培养。设置3个空白对照孔，只加无细胞的培养基。
3、24h后加入待检药品，可加入几种不同浓度的待检药品。对照组不加药，24h时选取其中3个孔更换新鲜培养基100ul，加入0.01ml的MTT（5mg/ml）放回37℃孵育4h，之后加入100ul的裂解液，37℃过夜。
4、5天后统一在酶标仪上于570nm下检测，得出OD值（或者加入裂解液后过夜每天检测）。以空白对照调节零点。
注意事项：
1、接种细胞要准确，接种时要充分使细胞混匀，防止细胞沉淀造成细胞接种不均。
2、MTT溶液见光后颜色会逐渐变深，因此在加入裂解液后96孔培养板应避光孵育/处理。
3、可以在全部MTT实验做完后一起上机检测OD值，但前提是前面已经做完了的须避光处理。也可采取加入裂解液后每天检测一次OD值，但使用的酶标仪应该性能稳定，隔天检测结果应一致。
