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细胞培养中的的支原体污染以及生长曲线测定(问答)

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1、  

问:测定细胞生长曲线的意义是什么?  

答:细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。因为细胞太小,无法测单个细胞的生长状态,所以测细胞群体的生长曲线。 


2、  

问:如何选择细胞接种数?     

答:可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算,细胞接种数因细胞的不同而不同。  


3、

问:细胞计数时为什么要用台盼蓝染色?  

答:加入台盼蓝后,活细胞不着色,台盼蓝着色的细胞呈深蓝色,是不健康或已死亡的细胞,不能计数。  


4、

问:细胞生长曲线测定时为什么要做重复孔?     

答:测定细胞生长曲线细胞计数时选择3个复孔,每孔分别计三次,取其平均值,目的是减小操作误差。 


5、

问:细胞生长曲线测定周期是几天?    

答:一般是一个星期。  


6、

问:为什么绘制的细胞生长曲线没有达到平台期?     

答:可能有以下原因:一是细胞接种密度过低;二是细胞培养时间过短;三是细胞生长状态不好,使其不能正常增殖。更多专业知识,登陆麒盟生物网站查询。 


7、

问:为什么细胞计数第一天,细胞数没有增加反而减少?     

答:一般细胞传代后,会有一个生长缓慢的潜伏期,细胞不增殖,而细胞会有正常的死亡,故细胞数不增加反而减少。 


8、

问:细胞生长曲线还有其他方法绘制吗?

答:当然有。我们提到最多的是直接计数的方法,除此以外还有相对计数的方法,该类方法首先要绘制标准曲线,标定细胞数和某个变量的函数关系,然后我们只需要测定每天这个变量的值便可以计算出细胞数。常用的是MTT、CCK8等比色的方法。细胞培养中的的支原体污染  支原体是一种大小仅为0.2~0.3μm,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22~0.45μm)的原核生物。  支原体是让每个细胞培养者崩溃的家伙。因为它极小,可以很轻松的通过滤膜,混入培养系统中,而且没有细胞壁,可以轻而易举的躲过抗生素,就这样悄无声息的杀死细胞,与细菌和真菌相比,支原体造成的污染不论在检测、预防还是去除上都更为困难。细胞培养过程中一旦有支原体污染,轻则实验失败,重则整个实验系统被污染,严重影响实验的进程,劳心劳力。  


为避免不必要的损失,细胞培养过程中要预防支原体的污染,以下是一些预防支原体污染的实践经验:  

1、从源头上遏制支原体,当有新细胞进入培养系统时,必须进行支原体检测,确定无污染后才能进行正常的培养,实验。 

 2、所有进入细胞库的细胞都必须确保无支原体污染。 

 3、人体是最大的支原体携带者,因此进入细胞培养室时,必须穿细胞室专用实验服,戴口罩、手套、帽子,女生的长发一律不可露在外边。 

4、培养每株细胞所用的培养试剂都需分开使用,避免交叉污染。  

5、细胞培养室必须进行定期的消毒,并定期对培养系统进行支原体检测。 

6、支原体污染后,不会使细胞死亡,可以与细胞长期共存,培养基一般不发生混浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感,实则细胞已受到多方面的潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等,在培养过程中,若发现细胞状态不对,破碎细胞甚多,必须立马进行支原体检测,切不可延误,有报道称25%的细胞都存在支原体污染。


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