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1、SP2/0骨髓瘤细胞的活化
骨髓瘤细胞的复苏:
A:从液氮罐中取出骨髓瘤细胞冻存管,放入37℃水浴锅中至完全融化;
B:1000r/min离心3-5min;倒弃上清液,用营养液(RPMI-1640,小牛血清的浓度在10%-20%)将下沉的细胞吹散悬浮后加入有适量营养液的细胞培养瓶中,置5%CO237℃培养箱培养;
C:次日观察骨髓瘤细胞的生长情况,如为圆形,透亮,呈轻微贴壁生长,则说明骨髓瘤细胞生长良好,如发现有些细胞发暗,漂浮于液体中,则可以换液,弃去漂浮的死亡细胞,此时存活的细胞大部分可贴壁生长并增殖.培养3-5d后进行细胞传代,扩大培养.
D:将细胞板中培养的SP2/0细胞，收集起来用0.5ml1640基础液悬浮.(0.5~1*106个)注射BALB/c小鼠背部皮下。待9~10d瘤子生长后，视大小选择取瘤细胞的时间。
2、SP2/0瘤细胞的制备
从小鼠背部生长的瘤子中制备的方法如下:
1．小鼠拉颈处死，75%酒精浸泡5min,超净台无菌状态取瘤；
2．先将肿瘤块剪下，放于匀浆器中，加5ml1640基础液充分研磨后，补加10ml1640液，静置2min，待较大的组织团块沉于管底后，吸取上层的细胞悬液于另一离心管备用，再补加10ml1640液，重复两次（在重悬的过程中，第一次应只吸出5ml，因为第一次匀浆器里面的细胞和大的组织块比较多，细胞下沉的速度比较）；
3．1000r/min离心10min去上清，以基础1640液重悬细胞，将细胞悬液体积控制在30ml；
4．于另一50ml离心管中加入15ml淋巴细胞分离液，将细胞悬液轻轻地加在分离液之上(比例为1:2到1:1)；
5．1200r/rnin 15min，用吸管吸取位于界面致密的白色细胞层，（吸管应该放在50ml离心管的中部去吸取，在离心管的内壁上有少许的组织和杂质，如果吸出的话，会影响瘤细胞的纯度）用1640液洗2遍，然后用10ml 1640重悬细胞，计数后备用。
